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聚丙烯酰胺凝膠電泳的原理以及SDS聚丙烯酰胺凝
發(fā)布時間:2020-10-20 15:35:14 編輯:博旭環(huán)保 銷售熱線:185-3821-8884

聚丙烯酰胺凝膠電泳(英語:polyacrylamide gelelectrophoresis,簡稱PAGE)作用:用于分離蛋白質(zhì)和寡核苷酸,聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺(簡稱Acr)和交聯(lián)劑N,N’一亞甲基雙丙烯酰胺(簡稱Bis)在催化劑過硫酸銨(AP),四甲基乙二胺(TEMED)作用下,聚合交聯(lián)成的具有網(wǎng)狀立體結(jié)構(gòu)的凝膠,并以此為支持物進行電泳。

聚丙烯酰胺凝膠電泳可根據(jù)不同蛋白質(zhì)分子所帶電荷的差異,及分子大小的不同所產(chǎn)生的不同遷移率,將蛋白質(zhì)分離成若干條區(qū)帶,如果分離純化的樣品中只含有同一種蛋白質(zhì),蛋白質(zhì)樣品電泳后,就應只分離出一條區(qū)帶。聚丙烯酰胺凝膠為網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),具有分子篩效應。它有兩種形式:非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(Native-PAGE)及SDS-聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)。

聚丙烯酰胺凝膠電泳

非變性聚丙烯酰胺凝膠,在電泳的過程中,蛋白質(zhì)能夠保持完整狀態(tài),并依據(jù)蛋白質(zhì)的分子量大小、蛋白質(zhì)的形狀及其所附帶的電荷量而逐漸呈梯度分開,SDS-PAGE僅根據(jù)蛋白質(zhì)亞基分子量的不同就可以分開蛋白質(zhì)。該技術最初由shapiro于1967年建立,他們發(fā)現(xiàn)在樣品介質(zhì)和丙烯酰胺凝膠中加入離子去污劑和強還原劑(SDS即十二烷基硫酸鈉)后,蛋白質(zhì)亞基的電泳遷移率主要取決于亞基分子量的大小(可以忽略電荷因素)。

SDS聚丙烯酰胺凝膠是一種陰離子表面活性劑,能打斷蛋白質(zhì)的氫鍵和疏水鍵,并按一定的比例和蛋白質(zhì)分子結(jié)合成復合物,使蛋白質(zhì)帶負電荷的量遠遠超過其本身原有的電荷,掩蓋了各種蛋白分子間天然的電荷差異。因此,各種蛋白質(zhì)SDS復合物在電泳時的遷移率,不再受原有電荷和分子形狀的影響,只是棒長的函數(shù),這種電泳方法稱為SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳(簡稱SDS—PAGE)。

由于SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳可設法將電泳時蛋白質(zhì)電荷差異這一因素除去或減小到可以忽略不計的程度,因此常用來鑒定蛋白質(zhì)分離樣品的純化程度,如果被鑒定的蛋白質(zhì)樣品很純,只含有一種具三級結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)或含有相同分子量亞基的具四級結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì),那么SDS—PAGE后,就只出現(xiàn)一條蛋白質(zhì)區(qū)帶。SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳可分為圓盤狀和垂直板狀、連續(xù)系統(tǒng)和不連續(xù)系統(tǒng),本實驗采用垂直板狀不連續(xù)系統(tǒng),所謂“不連續(xù)”是指電泳體系由兩種或兩種以上的緩沖液、pH和凝膠孔徑等所組成。

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